Miles Morales é um jovem negro do Brooklyn que se tornou o Homem-Aranha inspirado no legado de Peter Parker, já falecido. Entretanto, ao visitar o túmulo de seu ídolo em uma noite chuvosa, ele é surpreendido com a presença do próprio Peter, vestindo o traje do herói aracnídeo sob um sobretudo. A surpresa fica ainda maior quando Miles descobre que ele veio de uma dimensão paralela, assim como outras variações do Homem-Aranha.
Tico e Teco vivem entre desenhos animados e humanos em Los Angeles nos dias de hoje, mas agora suas vidas são bem diferentes. Já se passaram décadas desde que a série de sucesso da dupla foi cancelada, e Tico se rendeu a uma vida doméstica suburbana como um vendedor de seguros. Enquanto isso, Teco passou por uma harmonização facial em CGI e trabalha no circuito de convenções nostálgicas, desesperado para reviver seus dias de glória. Quando um ex-colega de elenco desaparece misteriosamente, Tico e Teco devem consertar a amizade rompida e assumir mais uma vez suas personalidades de Defensores da Lei para salvar a vida do amigo.
O Gato de Botas descobre que sua paixão pela aventura cobrou seu preço: ele queimou oito de suas nove vidas, deixando-o com apenas uma vida restante. Gato parte em uma jornada épica para encontrar o mítico Último Desejo e restaurar suas nove vidas.